Spectrophotomètre

Un spectrophotomètre UV-visible est un appareil qui sert à mesurer l'absorbance d'une solution homogène à une longueur d'onde donnée ou sur une région spectrale donnée.



Catégories :

Biologie cellulaire et moléculaire - Photométrie - Spectroscopie - Physique quantique - Instrument de mesure

Recherche sur Google Images :


Source image : fr.wikipedia.org
Cette image est un résultat de recherche de Google Image. Elle est peut-être réduite par rapport à l'originale et/ou protégée par des droits d'auteur.

Définitions :

  • Instrument qui mesure l'irradiance spectrale ou la radiance spectrale à certaines longueurs d'onde. (source : ec.gc)

Présentation

Un spectrophotomètre UV-visible («spectro UV») est un appareil qui sert à mesurer l'absorbance d'une solution homogène à une longueur d'onde donnée ou sur une région spectrale donnée. Selon la loi de Beer Lambert, l'absorbance d'une solution est proportionnelle à la concentration des substances en solution, à condition de se placer à la longueur d'onde à laquelle la substance absorbe les rayons lumineux. C'est pourquoi la longueur d'onde est réglée selon la substance dont on veut connaître la concentration (doser dans le jargon des chimistes) .

 A_\lambda = -\log_{10}\frac{I}{I_0} = \varepsilon_\lambda \cdot \ell \cdot C.

 \frac{I}{I_0} est la transmittance de la solution.

Spectre d'absorbance de NAD+ et de NADH, H+ (wavelength=longueur d'onde)

Ici les deux spectres sont juxtaposés, pour les réaliser indépendamment on a mesuré l'absorbance d'une solution de NAD+ (respectivement de NADH, H+) à différentes longueurs d'ondes (toutes choses identiques d'autre part).

La longueur d'onde d'absorbance maximale est ici λmax=260nm pour les deux molécules, Il sera par conséquent préférable de travailler à cette longueur d'onde. Par contre si on veut doser NADH, H+ lors d'une réaction enzymatique où le NAD+ est réduit en NADH, H+ par exemple, il est plus judicieux de travailler à λ=340nm car ici on ne mesure que NADH, H+ car l'absorbance de NAD+ est nulle même si il est présent dans le mélange.

Cette notion n'est pas applicable aux spectrophotomètres Infrarouge (IR) qui sont principalement utilisés pour l'identification. On peut dire que, quasiment, les spectros UV-visible sont utilisés pour des analyses quantitatives tandis que les spectros IR sont des instruments qualitatifs. Tous deux utilisent les principes optiques identiques, mais le spectro IR balaye en fréquence l'échantillon.


Spectrophotomètre de laboratoire (ouvert).
Spectrophotomètre de laboratoire (fermé).
autre spectrophotomètre.

Le spectrophotomètre UV (Ultra Violet) comprend :

La lampe UV est le plus souvent de type deutérium, la lampe visible est le plus souvent de type halogène, il existe aussi des spectrophotomètres à lampe xénon.

Les modèles de recherche sont le plus souvent à double faisceau et utilisent deux cuves, une cuve de référence avec le solvant et la cuve échantillon avec le produit dans le solvant, le solvant est alors soustrait automatiquement (fonction auto-zéro).

La spectrophotométrie est utilisée essentiellement pour connaître la concentration d'une solution colorée (procédé nommé dosage colorimétrique).

En biologie

 * ADN double-brin : 1 Abs = 50ng/µl
 * ADN simple-brin :
 * ARN :1 Abs = 40ng/µl

En médecine

L'analyse cinétique de différentes enzymes sanguines, dosage de la phosphatase alcaline : cholestase, lactate déshydrogénase : infarctus du myocarde, hémolyse.

En physique

L'analyse de la lumière sert à vendre les composants chimiques à l'origine de l'émission lumineuse : par exemple la présence de composés chimiques des étoiles.

En chimie

L'analyse de l'absorption des solutions permet le dosage de ces solutions selon une loi d'absorbance (la concentration est proportionnelle au logarithme de l'absorption lumineuse). Il y a par conséquent relation directe entre la quantité de lumière absorbée et la concentration en composé chimique de la solution. Le suivi dans le temps de l'absorption est une méthode de caractérisation de la vitesse de réactions chimiques (cinétique).

Dans les industries graphiques

Il sert à mesurer les couleurs pour calibrer des périphériques de sorties tels que les traceurs.

Voir aussi

Spectrophotométrie

Recherche sur Amazone (livres) :




Ce texte est issu de l'encyclopédie Wikipedia. Vous pouvez consulter sa version originale dans cette encyclopédie à l'adresse http://fr.wikipedia.org/wiki/Spectrophotom%C3%A8tre.
Voir la liste des contributeurs.
La version présentée ici à été extraite depuis cette source le 13/04/2009.
Ce texte est disponible sous les termes de la licence de documentation libre GNU (GFDL).
La liste des définitions proposées en tête de page est une sélection parmi les résultats obtenus à l'aide de la commande "define:" de Google.
Cette page fait partie du projet Wikibis.
Accueil Recherche Aller au contenuDébut page
ContactContact ImprimerImprimer liens d'évitement et raccourcis clavierAccessibilité
Aller au menu